Vybrané návody k laboratorním cvičením z molekulární biologie
Učební text „Vybrané návody k laboratorním cvičením z molekulární biologie“ je určen pro posluchače Jihočeské univerzity v Českých Budějovicích, kteří studují kurz molekulární biologie. Je koncipován jako sbírka vybraných praktických úkolů, které budou řešeny a provedeny při cvičeních ve studentské laboratoři. Před zahájením práce se předpokládá, že posluchači problematiku teoreticky zvládli. Vedoucí cvičení na začátku stručně vysvětlí, jaká je jeho náplň, poté posluchači samostatně pracují. Text stručně popisuje vybrané základní metody používané v molekulární biologii. Jeho účelem není nahradit rozsáhlé laboratorní manuály, ale ulehčit posluchačům přípravu a provedení vybraných úkolů.
Autor: Prof. Ing. Jindřich Čítek, CSc., Ing. Lenka Hanusová, PhD., Ing. Andrea Míková, Ing. Lucie Tothová, Ing. Kateřina Vernerová, Ing. et Ing. Božena Hosnedlová, PhD.
| Nakladatel | Jihočeská univerzita zemědělská fakulta České Budějovice. |
|---|---|
| ISBN | 9788073944438 |
| Vydání | 2014 |
| Vazba | brožovaná |
| Počet stran | 64 |
| Úvod. | 1 |
| 1. Pravidla bezpečnosti práce v laboratořích molekulární genetiky | 7 |
| 2. Příprava roztoků | 8 |
| 2.1 Izolace DNA | 8 |
| 2.1.1 Lyzační pufr | 8 |
| 2.1.2 Digi pufr | 9 |
| 2.1.3 PBS pufr | 10 |
| 2.2 Elektroforéza | 10 |
| 2.2.1 0,5 M EDTA (pH 8) | 10 |
| 2.2.2 TBE 10x (1 1) | 10 |
| 2.2.3 TBE 1x (1 1) | 11 |
| 2.2.4 Nanášecí (žlutý) pufr | 11 |
| 2.2.5 Ethidium bromid | 11 |
| 3. Izolace DNA | 12 |
| 3.1 Izolace DNA fenol-chloroformem | 12 |
| 3.2 Izolace DNA z plné krve metodou lyze bez čištění | 13 |
| 3.3 Izolace DNA pomocí komerčně vyrobených kitů | 13 |
| 3.4. Detekce a kvantifikace nukleových kyselin | 14 |
| 4. Elektroforéza nukleových kyselin | 18 |
| 4.1 Gelová elektroforéza | 18 |
| 4.2 Vizualizce molekul NK při gelové elektroforéze | 19 |
| 5. Polymerázová řetězová reakce (Polymase chain reaction - PCR) | 22 |
| 5.1 Reakční směs | 23 |
| 5.2 Určení koncentrací komponent reakční směsi | 24 |
| 6. Kvantitativní polymerázová řtězová reakce (Real-time PCR, qPCR) | 27 |
| 7. Design primerů | 34 |
| 7.1 Délka a sekvence primerů | 34 |
| 7.2 Annealingová teplota (pro nasedání primerů) | 34 |
| 7.3 Ředění primerů | 35 |
| 7.4 Koncentrace primerů pro PCR reakci | 36 |
| 8. Polymorfismus délky restrikčních fragmentů (Restriction fragment lengthpolymorphism - RFLP) | 39 |
| 9. Mikroskopování trvalých preparátů | 47 |
| 9.1 Popis mikroskopu | 47 |
| 9.2 Zásady práce s mikroskopem | 48 |
| 9.3 Kreslení biologických objektů | 48 |
| 9.4.1 Příprava trvalého preparátu s glycerol-želatinou | 49 |
| 9.4.2 Příprava trvalého preparátu s kanadským balzámem | 50 |
| 9.4.3 Příprava suchého trvalého preparátu rámováním | 51 |
| 9.5 Mikroskopované preparáty | 53 |
| 9.5.1 Mitóza rostlinných buněk | 53 |
| 9.5.2 Mitóza živočišných buněk | 55 |
| 9.5.3 Meióza | 55 |
| 9.5.4 Chromozomy člověka | 57 |
| 9.5.5 HeLa buňky | 59 |
| 9.5.6 Obří chromozomy | 60 |
| Použitá literatura | 63 |